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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
新鮮組織經(jīng)過(guò)取材、固定、脫水、透明、浸蠟后，用特定的包埋模具將前期處理的組織塊與融化的石蠟一起包埋成組織蠟塊的過(guò)程稱(chēng)為組織取材包埋。石蠟包埋不僅是經(jīng)典的病理實(shí)驗(yàn)方法，也是當(dāng)前臨床病理組織的常規(guī)儲(chǔ)存方式，能夠長(zhǎng)期保存并維持原始的細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)。
包埋的關(guān)鍵一是切面平整，二是方位正確。要求在包埋時(shí)，應(yīng)采用鑷子輕壓組織塊拱起部分，使之平貼于底部，通常采用組織的大面包埋，囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。特殊組織按特殊要求進(jìn)行包埋。
1、取材：使用鋒利的刀或剪切取組織，組織塊的厚度約為0.2-0.3cm，大小為1.5cm×1.5cm×0.3cm為宜。
2、固定：取好的組織塊用其10-20倍體積的固定液固定24-48h，固定液常用4%多聚甲醛或者10%緩沖中性福爾馬林（甲醛）液。
固定后的組織塊應(yīng)置水龍頭下以自來(lái)水流水沖洗，大塊組織一般沖洗24h，小塊組織一般沖洗2-10h。固定液為多聚甲醛時(shí)，用于免疫組織化學(xué)等特殊染色的組織應(yīng)將組織浸入磷酸鹽緩沖液中，每1h更換一次，重復(fù)6次。沖洗好的組織可存放在75%酒精中。
3、脫水：通過(guò)一系列濃度梯度遞增的酒精逐步將組織中的水分置換出來(lái)。從30％乙醇開(kāi)始，經(jīng)過(guò)50％、70％、80％、95％、100％至完全脫水。一般各級(jí)乙醇中放置45min-1h。過(guò)度脫水會(huì)導(dǎo)致組織變脆。脫水必須在有蓋的瓶中進(jìn)行，以防止高濃度乙醇吸收空氣中水分導(dǎo)致濃度降低而使脫水不徹底。
4、透明：脫水后，組織中的酒精需要被一種既能與酒精互溶又能溶解石蠟的有機(jī)溶劑（即透明劑，如二甲苯）置換出來(lái)。此步驟后，組織會(huì)呈現(xiàn)透明或半透明狀態(tài)，故得名“透明”。
通常使用二甲苯透明，透明時(shí)間應(yīng)由組織大小而定，—般各級(jí)停留時(shí)間在30min-2h，在純二甲苯中應(yīng)更換2次，總時(shí)間則以不超過(guò)3h為宜。時(shí)間過(guò)短透明不充分，影響浸蠟；時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則組織易收縮變脆變硬。可將組織塊先經(jīng)純乙醇與二甲苯的等體積混合液，再進(jìn)入純二甲苯。
材料經(jīng)過(guò)透明，會(huì)顯示出前一步脫水的效果如何，若脫水徹底，組織為透明狀態(tài)，若組織出現(xiàn)白色云霧狀，說(shuō)明脫水不凈，需要返工處理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明時(shí)，應(yīng)避免其揮發(fā)和吸收空氣中的水分，并保持其無(wú)水狀態(tài)。
5、浸蠟：用石蠟徹底取代組織中的透明劑，并為組織提供足夠的支撐硬度以便切片。須在恒溫箱中進(jìn)行，溫度調(diào)節(jié)至高于石蠟熔點(diǎn)3度，使經(jīng)過(guò)透明的組織塊依次用石蠟與二甲苯的等量混合液、純石蠟處理。純石蠟應(yīng)處理2-3次，時(shí)間依材料性質(zhì)而定，一般每次需15-30min。如果來(lái)不及包埋，可以將已經(jīng)完成浸蠟的組織塊取出放在恒溫箱外，第二天繼續(xù)。
6、包埋：使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。先準(zhǔn)備好包埋盒，將熔蠟（56-58℃或60-62℃硬蠟）倒入盒內(nèi)，迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在包埋盒底部，切面朝下，再把包埋盒平放在冷水中，待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳窈邪慈胨�，使其迅速冷卻凝固，30min后取出。包埋用蠟的溫度應(yīng)略高于透蠟溫度，保證組織塊與周?chē)炌耆跒橐惑w。石蠟的迅速冷卻也很重要，否則包埋塊中將會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶。以后切片時(shí)引起碎裂。待蠟塊完全凝固以后，便可取出蠟塊，置于常溫干燥的環(huán)境中保存。
1、客戶(hù)提供已固定但未包埋的組織樣本。組織離體后，選擇合適的固定液和容器立即固定，固定液的量建議大于組織體積的10-15倍，固定時(shí)間建議24-48h，大標(biāo)本固定12h，再切開(kāi)固定。標(biāo)本常溫（25℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷凍結(jié)冰。
2、固定樣本常溫運(yùn)輸送樣。運(yùn)輸過(guò)程中務(wù)必做好標(biāo)識(shí)，避免樣本混淆。
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