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實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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新聞資訊
骨組織由黏多糖和蛋白纖維構(gòu)成的有機(jī)質(zhì)及沉積于其中的無機(jī)鹽組成，無機(jī)鹽主要是羥基磷灰石結(jié)晶，其中大部分為磷酸鈣和碳酸鈣。由于骨的特殊構(gòu)成，使其質(zhì)地較硬，較難直接制片，因此必須對(duì)其進(jìn)行脫鈣處理。用化學(xué)或物理方法，從有機(jī)膠原基質(zhì)、鈣化軟骨和周圍組織中去除無機(jī)鈣的過程稱為脫鈣。常用的脫鈣方法分為快速脫鈣法和慢速脫鈣法。
快速脫鈣法主要利用酸性試劑（如硝酸）快速溶解骨組織或鈣化組織中的鈣鹽，速度快，但可能對(duì)組織結(jié)構(gòu)和生物大分子（如蛋白質(zhì)、核酸）造成一定損傷。
慢速脫鈣法主要使用乙二胺四乙酸（EDTA）作為脫鈣劑，EDTA是一種金屬離子螯合劑，能溫和地整合鈣離子，最大程度地保存組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物分子的完整性，但脫鈣速度非常慢。
1、取材骨組織或鈣化組織，厚度不宜超過5mm。通常先進(jìn)行固定（如用4%多聚甲醛固定24小時(shí)）然后用PBS和蒸餾水清洗。
2、脫鈣：
（1）快脫：將組織放入硝酸脫鈣液中，脫鈣液體積應(yīng)為組織體積的15-20倍。為加快脫鈣速度，可將其置于37℃中或采用微波輔助法（200W加熱5min，重復(fù)3-5次，中間間隔3-5min）。脫鈣時(shí)間通常為24-36h，具體時(shí)間需根據(jù)組織大小和密度調(diào)整。每天更換新脫鈣液直至脫鈣完成。
（2）慢脫：將組織浸入EDTA脫鈣液中，脫鈣液體積應(yīng)為組織體積的20-30倍。脫鈣過程通常在室溫下進(jìn)行，需數(shù)周至數(shù)月。為加快速度，可置于37℃中并定期（4-5天）更換一次新脫鈣液。
3、用細(xì)針輕刺組織，若無阻力感、組織變軟且能輕易彎折，即為終點(diǎn)。脫鈣完成后，用蒸餾水徹底沖洗組織。隨后進(jìn)行可常規(guī)脫水、包埋和切片。
1、骨組織取材盡量去除皮膚和肌肉，厚度不宜超過5mm，以便脫鈣液與骨組織充分接觸，加快脫鈣。
2、樣本放置于10-15倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣
3、固定液可多不可少；常溫（25℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷凍；切勿固定時(shí)間過長(zhǎng)。
4、若需要進(jìn)行免疫組化、原位雜交、分子生物學(xué)研究（如檢測(cè)特定抗原、核酸），推薦使用EDTA慢脫法，可最大程度保護(hù)樣本完整性。
5、若用于常規(guī)病理診斷、HE染色，且時(shí)間緊迫，可選用快脫法。
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