冰凍包埋是一種快速冷凍組織樣本的技術(shù),通過OCT包埋劑包裹組織并保存,通常用于冰凍切片。由于OCT一種水溶性混合物,冰凍切片在水中漂洗后即溶解,在后續(xù)染色中不會增加背景染色。OCT可以支撐組織,增加組織的連續(xù)性,減少褶皺及碎裂。不同于石蠟包埋,OCT包埋的樣本需要低溫-20℃保存,可以保存固定標本和新鮮標本。
冰凍包埋可最大程度保留蛋白質(zhì)抗原性、酶活性及RNA完整性,適用于免疫熒光、原位雜交、快速病理診斷及脂肪或腦組織研究。
1、樣本預處理:組織離體后立即置于冰上,用鋒利刀或剪將其修剪為≤0.5cm³小塊。預冷PBS沖洗后吸干表面液體(減少冰晶形成)。如果需要優(yōu)化形態(tài),用4%多聚甲醛4℃下固定30min;如國需要保留酶活性則無需固定。
2、OCT包埋: OCT包埋劑冰上預冷后,滴加少量OCT至包埋模具底層,將組織待觀察面朝下輕置于模具中央,補充OCT至完全覆蓋組織,操作過程中注意避免氣泡(可用針尖挑破或輕震模具)。
3、快速冷凍:將包埋模具浸入液氮預冷的異戊烷(-150℃)中5s,或置于-80℃冷凍臺10min。OCT完全變白固化后轉(zhuǎn)移至-80℃保存。
1、客戶需提供干冰保存運輸?shù)男迈r組織或常溫固定液保存的組織。
2、客戶應(yīng)使用合適的容器存放組織,不宜過小,不能用玻璃瓶,不能漏液。標本瓶上應(yīng)編號清楚,盡量簡易。
3、我們提供自封袋低溫保存的OCT包埋塊。
4、OCT包埋塊一旦解凍,不可重新冷凍使用。
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