石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中為廣泛應(yīng)用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織形態(tài)變化的主要方法。
石蠟切片適用于形態(tài)學(xué)觀察和組織結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)期保存,常用于常規(guī)的HE染色、特殊染色(如Masson、PAS)或免疫組化(IHC)等實(shí)驗(yàn)。
1、切片:將包埋好的蠟塊固定于輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)上,調(diào)整蠟塊切面與切片刀口平行并旋緊。根據(jù)組織類型調(diào)整切片厚度,搖動(dòng)切片機(jī)手輪進(jìn)行切片。先進(jìn)行粗切,厚度大約為15-30μm左右,質(zhì)地較硬或組織較小的組織的粗切厚度應(yīng)更薄,甚至不能粗切。粗切至組織完全暴露后,再進(jìn)行細(xì)切,一般為3-5μm。細(xì)切至組織塊表面均勻一致,無(wú)白點(diǎn),用毛筆輕托切出的連續(xù)蠟帶。切片時(shí)要求用力均勻,柔和,搖速不宜過(guò)快或過(guò)慢。切片的要求是完整、薄、均勻。
2、展片與貼片:將蠟帶或單個(gè)蠟片光亮面向下,平鋪于40-45°C的恒溫水浴中,利用水溫使蠟片自然展平無(wú)皺褶。用防脫載玻片撈起展平的蠟片,并擺正其在玻片上的位置。
3、烤片:將貼附好的玻片置于60°C恒溫箱中干燥2小時(shí),使蛋白質(zhì)凝固,從而讓切片牢固附著于載玻片上。水烤干、蠟烤化后取出玻片常溫保存?zhèn)溆谩?/span>
1、客戶提供已固定但未包埋的組織樣本用于石蠟包埋和切片。組織離體后,選擇合適的固定液和容器立即固定,固定液的量建議大于組織體積的10-15倍,固定時(shí)間建議24-48h,大標(biāo)本固定12h,再切開固定。標(biāo)本常溫(25℃左右)或冷藏(4℃)固定,切勿冷凍結(jié)冰。 固定樣本常溫運(yùn)輸送樣。運(yùn)輸過(guò)程中務(wù)必做好標(biāo)識(shí),避免樣本混淆。
2、客戶提供編號(hào)清晰的蠟塊或蠟頭用于石蠟切片,建議每個(gè)蠟塊多切幾張備用,如果是需要做多種染色或組化熒光建議連續(xù)切片一次性將需要做的染色片子預(yù)留出來(lái)備用,防止浪費(fèi)蠟塊組織,默認(rèn)做防脫切片。
3、特殊結(jié)構(gòu)或部位送樣時(shí)請(qǐng)附圖譜或者說(shuō)明,確保能夠快速準(zhǔn)確切到該區(qū)域。
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