冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻后進(jìn)行切片的方法。冰凍切片制作快捷、簡(jiǎn)便,無(wú)需脫水、透明等步驟,可最大限度保留組織的抗原活性和生物分子完整性,常用于術(shù)中快速病理診斷、免疫熒光、原位雜交、脂肪/腦組織研究、酶組織化學(xué)等研究。
1、切片:將OCT包埋并速凍后的組織塊置于-20°C恒冷箱切片機(jī)內(nèi),調(diào)整切片厚度進(jìn)行切片,常規(guī)切片厚度為8-12μm。
2、貼片與固定:從恒冷箱內(nèi)直接用載玻片貼附切好的冰凍切片并立即進(jìn)行固定,通常采用冷丙酮或 4%多聚甲醛固定1min左右,以保持組織形態(tài)并防止生物活性降解。
1、客戶提供干冰保存運(yùn)輸?shù)男迈r組織或常溫固定液保存的組織用于冰凍包埋和切片。應(yīng)使用合適的容器存放組織,不宜過(guò)小,過(guò)小會(huì)導(dǎo)致組織擠壓變形。不能用玻璃瓶,易碎;不能漏液,否則會(huì)導(dǎo)致編號(hào)模糊等情況。標(biāo)本瓶上應(yīng)編號(hào)清楚,盡量簡(jiǎn)易。
2、客戶提供干冰保存運(yùn)輸?shù)腛CT冰凍包埋塊用于冰凍切片。注意包埋塊編號(hào)清楚,運(yùn)輸過(guò)程中保證干冰充足,以防OCT包埋塊解凍。建議每個(gè)OCT包埋塊多切幾張備用,如果是需要做多種染色或組化熒光建議連續(xù)切片一次性將需要做的染色片子預(yù)留出來(lái)備用,防止浪費(fèi)組織,默認(rèn)做防脫切片。
3、特殊結(jié)構(gòu)或部位送樣時(shí)請(qǐng)附圖譜或者說(shuō)明,確保能夠快速準(zhǔn)確切到該區(qū)域。
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