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新聞資訊
抑郁癥、阿爾茲海默癥和帕金森氏病是三種常見的對腦功能產(chǎn)生重要影響的神經(jīng)精神類疾病。目前研究此類疾病模型主要方法是建立相關的動物模型，并進行相關行為學的實驗分析。
抑郁癥是一種功能性神經(jīng)障礙，以顯著持久的心境低落為核心特征，伴隨興趣減退、體重變化、睡眠障礙、社交回避等，部分患者伴有焦慮或自殺傾向。
阿爾茲海默癥（AD）是一種進行性神經(jīng)退行性疾病，以認知功能障礙、記憶喪失、神經(jīng)元死亡為主要特征，病理標志為β淀粉樣蛋白（Aβ）沉積和Tau蛋白過度磷酸化。
帕金森氏�。≒D）是一種運動障礙性疾病，主要癥狀包括靜止性震顫、肌強直、運動遲緩，核心病理為黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元進行性丟失、α-突觸核蛋白聚集形成路易小體。
（一）抑郁癥
1、動物造模
（1）糖皮質(zhì)激素誘導抑郁：皮下注射外源性皮質(zhì)酮，持續(xù)注射3周。
（2）慢性不可預知溫和應激 (chronic unpredictable mild stress，CUMS）模型：冷水浸泡、禁水禁食、氣味刺激、光周期改變等應激方法，造模持續(xù)4周。
（3）慢性束縛應激（Chronic Restraint Stress，CRS）抑郁模型：控制實驗動物在特制塑料管內(nèi)數(shù)小時，限制全身活動自由并禁水禁食，造模持續(xù)4周。
2、抑郁行為學檢測
（1）曠場實驗：記錄并分析實驗動物在曠場中不同區(qū)域所待的時間及尿便次數(shù)、直立次數(shù)等行為。
（2）強迫游泳實驗：記錄并分析實驗動物在局限環(huán)境（水中）掙扎行為和靜止不動的情況。
（3）糖水偏好實驗：記錄并分析實驗動物對蔗糖溶液（1%-2%)和普通水的飲用偏好情況。
（4）懸尾實驗：記錄并分析實驗動物在懸掛狀態(tài)下掙扎行為和肢體不動的情況。
（二）阿爾茲海默癥
1、動物造模
Aβ注射模型：向海馬區(qū)立體定位注射Aβ1-40，誘導急性神經(jīng)元損傷。
（1）麻醉：SD或Wistar大鼠經(jīng)腹腔注射 0.4% 戊巴比妥鈉（0.2ml/10g）麻醉,繼而固定于立體定向儀上。
（2）注射：按照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為零起點，前囟后3.5mm處為穿刺點，中線右側(cè)旁開2 mm，而后牙科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進針3mm，(即AP=-3.5 mm, ML=2.0mm，DV=3.0mm)，雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射Aβ1-40各10μg (1μl)，留針5 min后退針，骨蠟封閉顱骨孔后縫合切口。 （注意：注射時出血量較大的動物認定為失敗，排除在實驗之外。）
2、行為學檢測
所有組別在給藥一周后進行Morris水迷宮試驗，試驗分為定位航行實驗和空間探索實驗。
（1）定位航行實驗：大鼠連續(xù)接受5天的訓練，每天4次，每次時間間隔30min，記錄下大鼠4個不同入水點和入水后找到平臺所需要的時間，即逃避潛伏期。大鼠找到平臺后或120s 內(nèi)找不到平臺（潛伏期記為 120s），則由實驗者將其拿上平 臺，在平臺上休息15s再進行下一次試驗。每天以小鼠4次訓練 潛伏期的平均值作為小鼠當日的學習4次潛伏期的平均成績作為當日的最終結(jié)果進入到最后統(tǒng)計。
（2）空間探索實驗：實驗的第6天，撤去平臺，從距離平臺的最遠端入水后，記錄下2mis內(nèi)大鼠的游泳軌跡，并觀察分析大鼠在目標象限的停留時間，以及它的穿越平臺的次數(shù)。
3、檢測指標
行為學結(jié)束后，摘取大鼠全腦，冰上剝?nèi)バ∧X，將剩余部分左右對切，一半放入4%多聚甲醛中固定，用于病理學檢測。另一半取海馬用于PCR和蛋白檢測。
（1）組織病理學
①尼氏染色：海馬組織固定后石蠟切片，進行尼氏染色，觀察海馬區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)和數(shù)量。光學顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同一部位的神經(jīng)元數(shù)量，作統(tǒng)計分析。
②免疫熒光：免疫熒光染色，觀察海馬區(qū)Aβ1-40染色情況。熒光顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性斑塊數(shù)量，作統(tǒng)計分析。
③TUNEL染色： 海馬組織進行TUNEL染色，觀察神經(jīng)元凋亡情況。熒學顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性染色數(shù)量，作統(tǒng)計分析。
（2）標志因子水平：
①RT-qPCR檢測：收集海馬組織，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，PCR檢測caspase-3、Bcl-2和Bax的表達。
②Western-blot檢測：收集海馬組織蛋白，檢測active-caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表達。
（三）帕金森氏病
1、動物造模
（1）6-羥多巴胺（6-OHDA）模型
6-羥多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）是多巴胺的羥基化衍生物，因其化學結(jié)構(gòu)與DA類似，因此能夠同DA競爭攝取位點，進而被攝入胞內(nèi)。進入胞內(nèi)后，6-OHDA能夠被氧化分解，產(chǎn)生活性氧，通過MAO（單胺氧化酶）進一步產(chǎn)生氧自由基，或直接引起線粒體功能障礙，導致DA能神經(jīng)元死亡。因其造成動物的生物化學和神經(jīng)化學損傷類似于PD，故常被用于誘導動物PD模型。
①SD大鼠適應一周后，腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉（0.2ml/10g）麻醉，將麻醉后大鼠固定于腦立體定向儀上。剪開頭皮后用棉簽輕輕擦拭顱骨表面，暴露出前囟和后囟。
②調(diào)節(jié)立體定位儀，將前囟和后囟點的高度調(diào)節(jié)到一致。以前囟點為原點，找到注射位點所在的坐標。用顱骨鉆沿注射坐標位點鉆孔，以保證微量注射器進針時不碰到孔壁。使用微量注射器吸取6-OHDA（注意避光），緩慢插入注射位點，以0.5ul/min的速度將6-OHDA注射到目標腦區(qū)，注射劑量為4μl。
（2）MPTP模型
MPTP穿過血腦屏障，作用于神經(jīng)膠質(zhì)細胞，產(chǎn)生甲基苯基吡啶離子MPP+。MPP+抑制線粒體呼吸功能，產(chǎn)生氧自由基，從而損傷DA能神經(jīng)元，造成細胞數(shù)量減少。靈長類動物對MPTP最敏感但受限制，大鼠和其他造模動物對此神經(jīng)毒素具有較大的抵抗力，因此常用小鼠進行造模。
①快速模型：腹腔或皮下注射MPTP,試劑現(xiàn)配現(xiàn)用�？焖倌Ｐ涂煞譃閱未巫⑸浜投啻巫⑸洹未巫⑸涞膭�30mg/kg，該模型損傷輕，易恢復；多次注射的劑量為20mg/kg，每隔2h注射1次，共3-4次，該模型損傷快且嚴重，DA神經(jīng)元的損傷到死亡可以在3d內(nèi)完成。
②慢速模型：腹腔或皮下注射MPTP，試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。慢速模型需多次注射，每天1次，單次注射的劑量為20mg/kg，連續(xù)注射5-7d。該模型的成活率較高，實驗周期較長。
2、模型評價
帕金森動物模型會出現(xiàn)震顫麻痹、肌肉僵直等外在行為學上的癥狀，結(jié)合腦組織病理學指標。
（1）行為學實驗：游泳試驗，懸掛試驗，爬桿實驗。
（2）病理學指標：腦組織形態(tài)學（HE染色），紋狀體及黑質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)元數(shù)量 。
（3）生化指標：紋狀體內(nèi)多巴胺定量檢測，抗氧化酶活力檢測。
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