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產(chǎn)品中文名：大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標別名：ATF1; ATF2; HFB1-GDNF; Astrocyte-Derived Trophic Factor; Glial Derived Neurotrophic Factor

指標簡介：膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)是一種蛋白質(zhì)，由GDNF基因編碼。它于1991年被發(fā)現(xiàn)，是GDNF配體家族（GFL）的第一個成員。GDNF是一種小蛋白，能有效地促進多種類型的神經(jīng)元的生存。它還負責將精原細胞確定為初級精母細胞，即它被RET接收，并通過與SCF形成梯度，將精原細胞分成兩個細胞。GDNF的結(jié)構(gòu)與TGFβ2相似，它有兩個指狀結(jié)構(gòu)，與GFRα1受體相互作用。在原GDNF的分泌過程中發(fā)生的N-連接糖基化發(fā)生在其中一個指狀結(jié)構(gòu)的頂端。成熟的GDNF的C端在與Ret和GFRα1受體的結(jié)合中起著重要作用。

檢測范圍：31.2–2000pg/ml

靈敏度：＜5.67pg/ml

精密度：板內(nèi)變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標板已包被捕獲抗體，實驗時將待檢樣品（或標準品）加入酶標板反應孔中，捕獲抗體結(jié)合目的蛋白。加入生物素標記檢測抗體與目的蛋白結(jié)合，再加入 SABC 與標記抗體結(jié)合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關(guān)，通過繪制標準曲線計算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。或?qū)⑸锨逯糜凇?-20℃冷凍保存，避免反復凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內(nèi)置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

3、組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨�？梢詫驖{液進行反復凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進行 BCA 蛋白定量）�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

4、細胞裂解液：貼壁細胞用預冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集到的細胞用預冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細胞懸液，細胞濃度達到10^6個/ml 左右。通過反復凍融或超聲破碎使細胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

5、細胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關(guān)試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

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