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產品中文名：大鼠β-防御素2(BD-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

指標別名：Beta-defensin 2；B-DF2; DEFB2; BD2; DEF-B2; HBD2; DEFB102; HBD-2; SAP1; DEFB4A; DEFB4; Skin-Antimicrobial Peptide 1

指標簡介：β-防御素 2（BD-2）也被稱為皮膚抗菌肽 1（SAP1），是一種多肽，由 DEFB4 （防御素，β4）基因編碼。它是一種富含半胱氨酸的陽離子低分子量抗菌肽， 最近在病變皮膚中發(fā)現(xiàn)。hBD-2 是一種蛋白質，其主要結構是由 64 個氨基 酸組成。在濃度≤2.4 mM 時，hBD-2 是單體的。該結構是兩親的，表面正電荷分布不均勻，包含幾個關鍵的結構元素，包括一個三股反平行的β片， 其中第 2 股和第 3 股呈β發(fā)夾構象。其他結構元素的確定取決于所使用的技 術。當使用 X 射線晶體學時，可以在蛋白質的 N 端觀察到一個α螺旋（PDB 代碼：1fd3,1fd4 和 6cs9）。當使用核磁共振時，這個α螺旋沒有出現(xiàn)（PDB 代碼：1e4q），然而這個結構是用 hBD-2 的一個截斷版本確定的，它缺少 最初的 4 個氨基酸，這可能是造成差異的原因。

檢測范圍：15.6–1000pg/ml

靈敏度：＜2.84pg/ml

精密度：板內變異系數(shù)均＜9%，板間變異系數(shù)均＜10%

保存溫度：4℃

有效期：6 個月

檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒提供的酶標板已包被捕獲抗體，實驗時將待檢樣品（或標準品）加入酶標板反應孔中，捕獲抗體結合目的蛋白。加入生物素標記檢測抗體與目的蛋白結合，再加入 SABC 與標記抗體結合，形成捕獲抗體-目的蛋白-檢測抗體-SABC 免疫復合物，游離成分均被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在 450nm 波長處檢測吸光度(OD)，目的蛋白濃度與 OD450 值之間呈正相關，通過繪制標準曲線計算出樣品中目的蛋白的濃度。

樣品的收集和保存：

1、血清：全血樣品于室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 4℃，1,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。或將上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

2、血漿：用 EDTA 或肝素鈉抗凝管采集全血樣品，采集后 30 分鐘內置于 4℃冰箱，1,000×g 離心 15分鐘，取上清即可檢測。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

3、組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01mol/L， pH=7.4) 清洗組織，去除殘留血液，冰上切割組織后稱重。按組織重量(g): PBS 體積(ml) =1:9 的比例，加入 9 倍體積的 PBS（比如 1g 的組織樣品加入 9ml 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄），加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。可以對勻漿液進行反復凍融或超聲破碎以充分勻漿。最后將勻漿液于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測（如需要可取部分上清進行 BCA 蛋白定量）。或取上清置于≤ -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

4、細胞裂解液：貼壁細胞用預冷的 PBS 輕輕清洗，胰蛋白酶消化，1,000×g 離心 5 分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集到的細胞用預冷的 PBS 洗滌 3 次。PBS 稀釋細胞懸液，細胞濃度達到10^6個/ml 左右。通過反復凍融或超聲破碎使細胞裂解。4℃，3,000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測�；蛉∩锨逯糜凇� -20℃冷凍保存，避免反復凍融。

5、細胞培養(yǎng)上清或其他生物體液：收集液體后于 4℃，3000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測。樣本處理相關試劑推薦：PBS 緩沖液（貨號：U21-259B），0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化液（貨號：U31-323C），0.25%胰蛋白酶消化液（貨號：U31-324C）。

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