速看!少走實驗彎路~若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保存實驗數(shù)據(jù),保留所用板條及未使用試劑,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料: | |||||||||
1. ELISA加完所有試劑后,讀數(shù)所有孔都很弱或者沒有讀數(shù),陽性對照很弱,什么原因? | |||||||||
序號 | 可能原因 | 解決方法 | |||||||
1 | 不同種屬的試劑盒、不同批號的試劑混用 | 確定種屬、使用同一批次試劑盒里面的試劑 | |||||||
2 | 標準品有問題、標準品的處理方法有問題 | 反思實驗步驟、注意單位和稀釋倍數(shù)、稀釋方法 | |||||||
3 | 漏加酶結(jié)合物 | 回顧是否加入。未加入重新試驗 | |||||||
4 | 顯色液配置變質(zhì) | 更換新的顯色液 | |||||||
5 | 終止液當作其他溶液使用 | 每次加入之前檢查標簽是否一致 | |||||||
6 | 洗滌液配置有誤 | 按照說明書進行配置 |
2. ELISA實驗標準曲線很好,樣本OD值太高或太低,什么原因? | ||||||||
序號 | 可能原因 | 解決方法 | ||||||
1 | 標準曲線選擇不合適 | 選擇最佳的標準曲線擬合 | ||||||
2 | 樣本含量太低,沒有被檢測到 | 嘗試濃縮樣本或者使用高敏ELISA試劑盒 | ||||||
3 | 樣本含量太高,超過標曲 | 增加預(yù)實驗探索稀釋倍數(shù),確保樣本OD數(shù)值在標曲內(nèi) | ||||||
3. 標準品最高點吸光值一般在3.0左右,但是已經(jīng)是5左右了,什么原因? | ||||||||
序號 | 可能原因 | 解決方法 | ||||||
1 | 如果OD值絕對靠譜,那就是顯色過度 | 按照顯色的情況,之前介紹的標準進行終止 | ||||||
2 | 只做了單波長檢測 | 可嘗試使用雙波長檢測 |
4. 顯色很弱或無色,什么原因? | |||||||
序號 | 可能原因 | 解決方法 | |||||
1 | 孵育時間太短 | 保證充足的孵育時間 | |||||
2 | 實驗溫度不正確 | 使用推薦的實驗溫度(37℃) | |||||
3 | 試劑體積不夠或漏加 | 檢查吸液及加液過程,保證所有試 劑按順序足量添加 | |||||
4 | 稀釋不正確 | ||||||
5 | 酶標記物失活或底物失效 | 混合酶結(jié)合物和底物,通過迅速顯 色來檢查判斷 | |||||
5. 讀數(shù)數(shù)值低,是什么原因? | |||||||
序號 | 可能原因 | 解決方法 | |||||
1 | 酶標儀設(shè)置不正確 | 在酶標儀上檢查波長及濾光片設(shè)置;提前打開酶標儀預(yù)熱 |
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