做ELISA實驗結(jié)果總是不滿意？看看是不是這幾個點沒注意到....

Q1：為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？

上海軒澤康生物技術(shù)解析：溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素，為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫。包括檢測樣本，避免因溫度的動力學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。

Q2：ELISA實驗為什么必須設(shè)置復(fù)孔？

上海軒澤康生物技術(shù)解析：復(fù)孔檢測可以計算平均值，確保實驗結(jié)果更加準(zhǔn)確；同時還能解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計算CV值，可以對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。

Q3：為什么實驗過程中孵育洗滌需要振蕩？如何振蕩？

上海軒澤康生物技術(shù)解析：孵育過程振蕩可以加快、加強抗原抗體分子間的相互碰撞接觸，使得反應(yīng)過程更加完全。OD值通常會比未振蕩孵育的結(jié)果要高。洗滌過程振蕩可以使洗板更干凈，在很大程度上能降低背景值。同時可以提高試劑盒檢測的靈敏度。

        ELISA檢測原理：向預(yù)先包被有目標(biāo)物檢測因子捕獲抗體的微孔中，加入待檢測的樣本、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記的檢測抗體、HRP酶結(jié)合物，經(jīng)過溫育和洗滌，用底物TMB顯色，TMB在酶的作用下轉(zhuǎn)化為藍色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化為黃色。顏色的深淺與樣本中目標(biāo)檢測因子呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450nm下測定吸光度，即可根據(jù)標(biāo)曲計算樣品中目標(biāo)檢測因子的濃度。