沙鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒使用手冊 

                                                                       產(chǎn)品貨號：XZK-15392

【摘要】：腫瘤壞死因子α（TNF-α）是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生的促炎細胞因子，并參與正常炎癥反應和免疫反應。它由中性粒細胞、活化的淋巴細胞、巨噬細胞、NK細胞、LAK細胞、星形膠質(zhì)細胞內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和一些轉(zhuǎn)化細胞產(chǎn)生。

【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中TNF-α含量。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費代測服務，歡迎咨詢、訂購！

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α（TNF-α）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

沙鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請以新版說明書為準）

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數(shù)量與表格是否一致。 

樣本處理及要求：

【血清】：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

【血漿】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

【組織勻漿】：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

【細胞培養(yǎng)物上清】：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

【其它生物標本】：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

【樣品外觀】：樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。

【樣品保存】：樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

試劑的準備：

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。