豬粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）

ELISA檢測試劑盒使用手冊 

                                                                       產(chǎn)品貨號：XZK-10985

【摘要】：粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）是一種由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌的單體糖蛋白，具有細(xì)胞因子的功能。自然產(chǎn)生的GM-CSF的藥物類似物被稱為sargramostim和molgramostim。與專門促進(jìn)中性粒細(xì)胞增殖和成熟的粒細(xì)胞集落刺激因子不同，GM-CSF影響更多的細(xì)胞類型，特別是巨噬細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。

【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中GM-CSF含量。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費(fèi)代測服務(wù)，歡迎咨詢、訂購！

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

豬粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請以新版說明書為準(zhǔn)）

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致。 

樣本處理及要求：

【血清】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【血漿】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【其它生物標(biāo)本】：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

【樣品外觀】：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

【樣品保存】：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

試劑的準(zhǔn)備：

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。