大鼠AKT蛋白（AKT）ELISA檢測試劑盒使用手冊 

                                                                       產(chǎn)品貨號：XZK-DS34

【摘要】：AKT蛋白，也被稱為蛋白激酶B（Protein Kinase B，PKB），是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，在細胞信號轉(zhuǎn)導中發(fā)揮著關鍵作用。它調(diào)控多個生物過程，包括細胞存活、增殖、生長、蛋白質(zhì)合成、細胞周期控制、葡萄糖代謝、細胞凋亡、基因組穩(wěn)定以及血管生成等。

【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中的AKT。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費代測服務，歡迎咨詢、訂購！

檢測前準備工作：

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠AKT蛋白（AKT）ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請以最新說明書為準）

操作步驟:

【試劑盒平衡至室溫】：從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

【標準品加樣】：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

【加樣】：樣本孔先加待測樣本 10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL

【溫育】：用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

【洗滌】：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5 次（也可用洗板機洗板）。

【顯色】：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育15min。

【終止、測定】：每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD 值。

說明：

1.      由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術風險。

2.      最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

3.      不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4.      只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。